【产品名称】
通用名称：白喉类毒素IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
【包装规格】
96人份/盒
【预期用途】
本产品用于体外定性检测人血清/血浆或全血样本中的白喉类毒素IgG抗体。
适用于白喉杆菌感染的辅助诊断、检测正常或易感人群抗白喉类毒素IgG抗体水平是否达到完全保护滴度（0.1IU/ml）以及接种含白喉类毒素成分疫苗后抗白喉类毒素IgG抗体水平是否达到免疫成功标准（0.1IU/ml）。
白喉是一种急性上呼吸道传染病，由革兰氏阳性白喉棒状杆菌引起。细菌毒素可以引起产生上呼吸道阻塞性假膜或损伤心肌及其他组织，从而致病和致死。历史上许多国家都发生过以儿童为主的白喉大流行。在白喉呈地方性流行的国家，该病多为散发病例或小规模爆发。尽管大多数的白喉杆菌感染为隐性或临床症状相对较轻，但其病死率高（>10%），即便在Zui近的爆发中亦是如此。
白喉杆菌是细长、棒状、革兰氏阳性杆菌，有4个生物型（重型、belfanti、轻型、中间型）。除细菌外毒素外，细胞壁成份如O抗原和K抗原，在白喉的致病性中均具有重要作用。所有棒状菌属的热稳定性O抗原都相同，而热不稳定K抗原，则因菌株不同而有差异，因而可用于鉴别菌株。同时，K抗原对于粘膜吸附很重要，侵袭性是由索状因子（毒性糖脂）介导的。白喉杆菌Zui重要的毒力因子是外毒素，外毒素是由噬菌体介导、细菌染色体编码的高度保守性多肽。在宿主细胞外，外毒素的活性很低，但通过非毒性片段B粘附并进入细胞后，毒性片段A解离，通过抑制细胞蛋白合成杀死细胞。白喉外毒素可引起局部和全身细胞死亡。
多数情况下，白喉易感者感染后只引起一过性的咽部带菌而不发病。由皮肤伤口污染可引起皮肤白喉，偶尔会引起呼吸道以外的粘膜感染。皮肤和粘膜损伤是重要的感染源，偶然会引起全身性病理反应。呼吸道白喉的症状一般在1～5天的潜伏期后出现，疾病发作较慢，以中度发热和轻度的渗出性咽炎为特征。严重病例在喉部逐渐形成所谓的假膜，具有典型的不对称的灰白色外观并与深层组织紧密附着。假膜可扩展到鼻腔和喉头，引起呼吸道阻塞。喉白喉有时可无咽部症状，是常常需实行气管切开术的急症。经粘膜（或皮肤）损伤处吸收的外毒素可引起心肌、肾脏以及神经系统等器官的毒性损伤。
对严重的局部疾病和全身性疾病的免疫主要依赖于抗毒素抗体 IgG，而对带菌和轻型局部疾病的型特异性保护是诱生抗细胞壁变异性K抗原的抗体。细胞免疫也可能起保护作用。然而，有时感染不会诱导保护性免疫。循环抗毒素的水平在 0.01 IU/ml 以下时没有保护， 在 0.01 IU/ml 时有部分保护，≥0.1 IU/ml 时有完全保护，1.0 IU/ml 的抗毒素水平与长期的保护性免疫相关。抗毒素能够通过胎盘，新生儿出生后头几个月可获得被动免疫。
目前检测白喉类毒素特异性的IgG抗体的主要方法有：锡克氏试验、细胞中和试验、酶联免疫法（ELISA）等。
【检验原理】
试剂盒采用酶联免疫间接法原理。
本试剂盒系用精制白喉类毒素抗原包被微孔板。样品加入微孔后，其中抗白喉类毒素抗体与微孔中固相化白喉类毒素抗原形成抗原-抗体免疫复合物，洗涤去除未结合物，加入辣根过氧化酶标记小鼠抗人IgG单克隆抗体，与复合物反应形成抗原-抗体-酶标二抗复合物，洗涤去除未参与反应的酶结合物，加TMB底物显色，呈色的深浅与白喉类毒素IgG抗体的含量成正比。
【主要组成成份】
序号
组份名称
规格与数量
组份主要成分
1
预包被板
12T×8
白喉类毒素抗原
2
小鼠抗人IgG单克隆抗体酶标记物
10ml×1瓶
HRP酶标记的小鼠抗人IgG单克隆抗体，含稳定剂、生物防腐剂
3
浓缩洗涤液（20×）
30ml×1瓶
20倍浓缩磷酸缓冲液，含NaCl、吐温-20
4
样品稀释液
50ml×1瓶
柠檬酸钠缓冲液、稳定剂等
5
阴性对照品
0.5ml×1瓶
灭活人源抗白喉类毒素IgG阴性血清，稳定剂
6
阳性对照品
0.5ml×1瓶
灭活人源抗白喉类毒素IgG阳性血清，稳定剂
7
底物液A
5.0ml×1瓶
主要成分为过氧化脲
8
底物液B
5.0ml×1瓶
主要成分为TMB
9
终止液
5.0ml×1瓶
0.5M H2SO4溶液
10
自封袋
1份
――
11
封口膜
3张
――
我公司不同批号、不同品种试剂盒中的相同组分不得混用。不可与其他厂家试剂混用。
【储存条件及有效期】
1. 于2~8℃冷藏、避光保存，禁止冷冻，有效期为12个月。
2. 未用完的预包被板应立即与干燥剂一起放入自封袋中密封，2~8℃环境中保存时间不得超过一周。
3. 未用完的其他组份试剂应立即将瓶盖盖好，置于2~8℃环境中保存，保存时间不得超过一周。
4. 产品的生产日期及有效期至详见产品标签。
【适用仪器】
含450nm波长的酶标仪或全自动酶免分析仪。
【样本要求】
1. 人血清/血浆或全血均可用作测定样本。抗凝剂（肝素、EDTA、柠檬酸钠）对样本检测结果无干扰。
2. 血清/血浆样品2～8℃冷藏保存可稳定4天，但建议在72小时内使用；全血样本即采即用；若需长期保存，血清/血浆样品可直接-20℃冷冻保存可稳定一年，全血样本可用样品稀释液稀释后吸出上清液，-20℃冷冻保存可稳定一年。冻存的样本冻融次数建议不超过3次。
3. 应避免使用溶血、脂血样本，不能使用被污染的样本。
【检验方法】
1.样品准备
1.1 先向1.5ml离心管中加入样品稀释液500μl。编号。
1.2 采集全血10μl，或吸取血清/血浆5μl，加入相应的离心管中，立即轻摇、混匀。
1.3 若为全血样品，将离心管置室温（或4℃冰箱）静置，待红血球全部沉降到孔底，取上清液检测；若为血清或血浆样品，混匀后即可使用。
2. 将试剂盒和样品从冷藏环境中取出，放置30分钟，平衡至室温；恒温箱或水浴锅调节至37±1℃。
3. 配制洗涤液：1倍体积的浓缩洗涤液加入19倍体积的蒸馏水、纯化水或去离子水，混匀。
4. 加样：每次试验设阳性对照1孔、阴性对照1孔，每孔加入相应的对照液100μl；设空白对照1孔，加样品稀释液100μl；其余每孔加入已稀释的样品（全血样品取上清液）100μl。贴上封口膜，置37℃温育60分钟后，小心将封口膜揭掉，倒掉孔中的液体。每孔加300μl已稀释好的洗涤液，轻微振摇10秒后倒掉，拍干。重复5次。有条件的可按上述洗涤条件设置参数，用洗板机洗涤。
5. 加抗人IgG抗体酶标记物：每孔100μl（空白孔不加）。贴上封口膜，置37℃温育30分钟后，小心将封口膜揭掉，倒掉孔中的液体。每孔加300μl已稀释好的洗涤液，轻微振摇10秒后倒掉，拍干。重复5次。
6. 显色：每孔加底物液A及底物液B各50μl，混匀。贴上封口膜，置37℃避光显色15分钟。
7. 测定：小心将封口膜揭掉，每孔加终止液50μl，混匀。30分钟内用酶标仪双波长450nm/630nm测定各孔OD值(使用单波长450nm时，必须以空白孔调零）。
【阳性判断值】
1. 阴性对照OD450＜0.3，阳性对照OD450≥0.6，试验成立。
2. Cut-Off 值 = 阴性对照OD450值 × 2.1，S/CO值 =
0.9≤S/CO值＜1.1，判为可疑，建议重复检测；
S/CO值≥1.1，判为阳性；
S/CO值＜0.9，判为阴性。
【检验结果的解释】
本试剂盒Cut-off值设定在白喉类毒素IgG抗体完全保护滴度0.1IU/ml（原始样品）。
1. 阳性结果：提示白喉杆菌既往感染或接种过含白喉类毒素成分疫苗且已产生抗体，抗体水平不低于0.1IU/ml，达到完全保护滴度。
2. 阴性结果：提示体内白喉类毒素IgG抗体水平低于0.1IU/ml，未达到完全保护滴度。
3. 可疑结果：对可疑结果建议重复检测或两周后再次检测，动态观察抗体水平的变化。
【检验方法的局限性】
仅用于人体内白喉类毒素IgG抗体的定性检测。
